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    技術支持

    抽提RNA實驗色素污染去除方法

    更新時間:2024-03-01   點擊次數:94次

    用Trizol法沉淀RNA容易有一些雜質的。部分色素是會和RNA一起沉下來。這種情況可以用75%冷的乙醇多洗幾遍。對后續qRT-PCR多數情況下沒什么影響。

    另外可以用硅膠柱法純化RNA,色素殘留會少一些。

    RNase污染的來源

    1:手指頭 – 手指頭是外源酶的第1來源,所以必需戴手套并且頻繁更換。另外,口罩也必需戴,因為呼吸也是一個重要的酶來源。戴手套口罩的另外的好處是保護實驗人員。

    2:槍頭,離心管,移液器 單純的滅菌是不能滅活RNase的,所以槍頭和離心管要用DEPC處理,即使是標明為DEPC處理過的。移液器最/好是專用的,用前用75%的酒精棉球搽拭干凈,尤其是桿子;另外,一定不要使用褪頭器。

    3:水/緩沖液 一定要確保無RNase污染。

    4:實驗臺面最起碼要用 75% 的酒精棉球搽拭干凈。

    5:內源 Rnase 所有組織均含內源酶,故組織用液氮速凍是降低降解的最/好辦法。液氮保存/碾磨方法的確不方便,但對有一些內源酶含量很高的組織,卻是唯1的辦法。

    6:RNA 樣品 RNA抽提產物可能都會含痕量的RNase污染。

    7:質粒抽提 質粒抽提往往用到RNase降解RNA,殘留的RNase要用 Proteinase K 消化,PCI 抽提。

    8:RNA 保存 即使低溫保存,痕量的RNase亦會導致RNA降解。長/期保存RNA的最/好辦法是鹽/醇懸液,因為醇在低溫時抑制所有的酶活性。

    9:陽離子 (Ca, Mg) 在含這些離子時,80℃加熱5分鐘會導致RNA被剪切,故如果RNA需要被加熱,保存液需要含螯合劑(1mM Sodium Citrate, pH 6.4)。

    10:后續實驗所用的酶 酶均有可能被Rnase污染。

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