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                        上海遠慕生物科技有限公司
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                        技術支持

                        細胞株培養過程中常見問題解決

                        更新時間:2024-03-22   點擊次數:22次

                           細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。然而,細胞株在體外培養的過程中會出現一些問題,比如:細胞株無法在培養皿上貼壁生長,細胞株生長緩慢,細胞株死亡等。那么該如何解決呢?


                        QQ圖片20220624160717.jpg


                          一、細胞株無法在培養器皿上貼壁生長

                          細胞株胰酶消化過度:縮短胰酶消化時間或減少胰酶用量。

                          2.支原體污染:隔離細胞株,檢測是否感染支原體;清洗通風廚和培養箱,如細胞株被污染,滅菌處理后丟棄。

                          3.培養基中無附著因子:如果使用的是無血清配方,應確保含有附著因子或者使用經過包被的培養板。

                          二、細胞株生長緩慢

                          培養基或血清改變:比較不同培養基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有無差異;通過生長實驗比較新老批次血清有無差異;增大細胞株初始接種密度;使細胞株逐步適應新的培養基。

                          2.必需生長促進成分(如L-谷氨酰胺或生長因子)耗竭、缺乏或分解:去除原培養基,加入新鮮培養基;向培養基中添加生長促進成分(如L-谷氨酰胺)。

                          3.輕度細菌或真菌污染:在不添加抗生素的條件下進行培養,如細胞被污染,滅菌處理后丟棄。

                          4.時間存儲不當:血清應于-5℃至-20℃下儲存;培養基應于2℃~8℃下避光儲存;盡量減少血清和培養基見光時間。

                          5.細胞株初始接種密度低:增大活細胞接種密度。

                          6.細胞株衰老、老化:將老化細胞丟棄,取用代數較少的細胞。

                          7.支原體污染:隔離細胞株,檢測是否感染支原體;清洗通風廚和培養箱,如細胞被污染,滅菌處理后丟棄。

                          三、培養基pH值變化迅速

                          1.培養箱CO2分壓設置錯誤:根據培養基中NaHCO3的濃度增大或降低培養箱CO2的分壓,NaHCO3濃度為2.0-3.7g/L時,應相應地使用5%-10%的CO2分壓。

                          2.細胞培養瓶瓶蓋過緊:將瓶蓋旋松1/4圈。

                          3.碳酸氫鹽緩存系統緩沖能力不足:加入HEPES緩沖液,使其終濃度為10-25mM。

                          4.培養基中鹽含量不正確:CO2平衡環境中使用以Earle平衡鹽為基礎的培養基,大氣條件下使用以Hanks平衡鹽為基礎的培養基。

                          以上就是細胞株在培養過程中可能出現的問題、原因以及解決方法,希望可以幫助大家在培養細胞株過程中遇到的困難,僅供參考。

                          5.細菌、酵母或真菌污染:將細胞和培養基滅菌處理后丟棄。

                          四、細胞株凋亡

                          培養箱中無CO2:監測培養箱中CO2使用速度以便確定及時更換氣瓶;經常檢測管路連接處是否漏氣;不要頻繁開啟培養箱門。

                          2.培養箱內溫度有波動:監測培養箱內溫度,及時校正。

                          3.使用抗生素達到毒性濃度:減少抗生素的用量;使用無血清培養基時,抗生素濃度應降低至1/10。

                          4.細胞株復蘇或凍存時受到損傷:取用新的細胞。

                          5.培養基的滲透壓不合適:檢查wan全培養基的滲透壓。大多數哺乳動物細胞可耐受260~350mOsm/kg的滲透壓,加入某些試劑和藥物后會影響培養基的滲透壓;昆蟲細胞培養基的滲透壓(340~380mOsm/kg)要高于哺乳動物細胞。

                          6.培養基中毒性代謝產物蓄積:去除原培養基,換用新鮮培養基。

                          五、懸浮細胞株集成團

                          存在鈣離子和鎂離子:用不含鈣離子和鎂離子的平衡鹽溶液清洗細胞,輕輕吹打細胞,使其形成單細胞懸液。

                          2.支原體污染:隔離細胞,檢測是否感染支原體;清洗通風廚和培養箱,如細胞被污染,滅菌處理后丟棄。

                          3.蛋白水解酶消化過度導致細胞裂解、DNA釋放:用0.001%DNA酶I處理細胞;用PBS沖洗后再接種到新培養基中。


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